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微滴式数字PCR（Droplet Digital PCR, DDPCR）是第三代 PCR（Polymerase Chain Reaction，欧博官网聚合酶链式反应）技术，是一种对核酸分子进行绝对定量的方法。 微滴式数字PCR系统在传统的PCR扩增前对样品进行微滴化处理，即将含有核酸分子的反应体系分成数万个纳升级的微滴，其中每个微滴或不含待检核酸靶分子，或者含有一个至数个待检核酸靶分子。经PCR扩增后，对每个微滴的荧光信号进行逐一分析，有荧光信号的微滴判读为1，没有荧光信号的微滴判读为0，根据泊松分布原理及阳性微滴的个数与比例即可得出靶分子的起始拷贝数或浓度。 Bio-Rad QX200 Auto DG Droplet Digital PCR System 是第一台同时获得 CE-IVD、美国 FDA510K 的数字 PCR 系统。这一型号大大简化了微滴生成的步骤，在45分钟内即可全自动完成96个样品的微滴生成。微滴的全自动生成，消除了不同操作者的人为操作误差，确保了微滴发生的一致性。
性能指标
最准确、最灵敏的数字PCR解决方案，具有广泛的应用； 灵活的数字PCR化学方法； 灵活的测定设置，可通过扩展实现高度的灵敏性或较大的通量； 简便而易用的工作流程，通量达96个样品； QX200 Droplet Digital 技术的微滴划分功能可减少扩增效率和PCR抑制剂的影响； 便捷的测定设计，不需要标准曲线。 可运用于： 1，癌症生物标志研究和拷贝数变异分析，以卓越的灵敏度和解析能力测量癌症突变的变异程度、检测稀有的 DNA 靶拷贝以及解析拷贝数变异状态。 2，病原体检测，采用极为精确的 QX200 系统对靶 DNA 或 RNA 分子中的细微变化进行定量分析，从而检测和监测病原体。 3，新一代测序，无需使用标准曲线，直接对 NGS 库执行绝对定量分析。 4，基因表达分析，对少量 mRNA 和 miRNA 的细微变化进行可靠和可重复的检测。 5，环境监测，使用 QX200 系统可测试多种环境样品，欧博例如土壤和水。 6，食品检测，采用经过验证的 ddPCR 方法对转基因生物体 (GMO) 进行评估。
仪器配置
1，全自动微滴自动生成仪 2，PCR板热封仪 3，热循环扩增仪 4，QX200 微滴读数仪
操作规范
1. 连接Automated Droplet Generator电源，接着会出现开机画面，开机后仪器会进行自检。这时仪器门如果开着会自动关闭；如果仪器处于待机模式，点击彩色触屏界面，仪器进行自检。 2. 设置样品板： 2.1 点击触屏界面底部中间位置的按键,接着出现96孔板示意图； 2.2 对应样品所放位置，点击触摸屏选择相应的每列孔。可以任意选择每列孔（重新点击后取消选择）。这时也可以在左上角编辑此次反应的名称。都完成后点击OK； 2.3 系统会根据选择的样品总数量计算出是否需要添加新的耗材，如果需要添加新的耗材，触摸屏对应耗材的位置会闪烁黄灯。 3. 放置耗材，为了避免污染，建议从仪器后面向前面依次放入所需耗材： 3.1 通过向上提门上的把手打开仪器门； 3.2 最里面三个位置是放微滴放生卡 DG32 cartridges的位置，没有放置微滴放生卡时，指示灯显示黄色；将微滴放生卡 DG32 cartridges放入后，指示灯显示绿色，同时触摸屏对应位置也显示 Ready 的绿色。注意DG32 cartridges放置方向，如果方向不对，是无法顺利放入仪器中的； 3.3 中间两个位置是放置吸头的位置，同样在没有放置吸头时，指示灯显示黄色；将吸头盒的盖子去除，整盒吸头放入后，指示灯显示绿色，同时触摸屏对应位置也显示 Ready 的绿色。同时将一空的吸头回收盒放到仪器中间的凹槽里。注意：目前只有配套的AutoDG吸头可以用，其他品牌吸头会对仪器造成损伤。 4. 将盛载ddPCR 反应体系的96孔板样品板放在仪器最前面左侧位置： 4.1 需要提前配好总体积是22ul的ddPCR 反应体系，充分混匀，转移到96孔板中。然后在PX1封膜仪上进行封膜； 4.2 将封好的样品板放置在仪器最前面的左侧位置，指示灯由黄色变为绿色，同时触摸屏对应位置显示 Ready 的绿色。注意样品板的方向，如果方向不对，指示灯颜色不会改变。 5．将接收微滴的微滴接收板放在仪器最前面右侧位置： 5.1 将放在-20℃的冰盒取出（至少在-20℃下放置2小时，冰盒在常温下是粉红色，冷冻后变为深蓝色），放到仪器最前面右侧位置。指示灯由黄色变为绿色，同时触摸屏对应位置显示 Ready 的绿色。注意样品板的方向，如果方向不对，指示灯颜色不会改变； 5.2 取一块干净的96孔板，放到冰盒上，用于接收生成的微滴。 6. 装载微滴生成油： 6.1 打开Auto DG专用微滴生成油油瓶的盖子，将油瓶拧到仪器左侧对应位置上； 6.2 点击触摸屏上Oil Type图标，选择微滴生成油类型，Probe或者EveGreen；这时触摸屏上Oil level图标变绿色，并显示当前生成油剩余量。 7. 开始运行： 7.1 当耗材及微滴生成油都放置到仪器后，触摸屏右下角的START 图标变绿色； 7.2 点击START 图标会弹出包含当前设置的对话框； 7.3 点击Start Run图标，仪器门会自动关闭。这时触摸屏显示初始化，初始化一般时间是1-5min；然后仪器开始工作，并显示剩余时间。 8. 微滴生成结束后，触摸屏上会显示Droplets Ready图标，同时显示完成的时间。 9. 打开仪器门，将盛有微滴的96孔板从冰盒上取下，将膜有红线标记的一面（反光亮面）朝上置于96孔板上并固定好，用预热好的PX1热封仪对其进行封膜，推荐的运行程序为：180℃，5s，无需颠倒方向进行二次封膜。
技术资料
QX200 微滴发生器
服务协议
1. 本协议涉及仪器为微滴式数字PCR，制造商为BioRad，型号为QX200 AutoDG Droplet Digital PCR System，使用的微滴生成油为 Automated Droplet Generation Oil for Probes。具体内容包括服务预约、收费以及管理办法等。 2. 正常运行状态下，仪器开放时间为工作日09：00 – 18：00。国家法定公休日、节假日一般不提供服务。平台保证仪器软、硬件在服务期间处于良好的运行状态。 3. 本仪器服务费用，收费标准如下： a) 开机费400元/次（如长期使用有折扣）。 b) 耗材费按照实际使用情况结算，按照进货价格加上7%的税点计算，约333元/8孔（不包括探针、ddPCR probe supermix和96孔板）。 c) 为了方便用户使用该仪器，平台提供相关试剂耗材的领用（除检测探针）。 d) 由于仪器服务使用成本的变动，平台保留随时调整收费标准的权利。 4. 用户应提前至少1个工作日通过电话、微信或者电子邮件等向仪器管理员进行预约，对于当天提出的预约，平台不能保证予以优先安排。 5. 若用户对管理员安排的机时无异议，则须严格遵守，若超出预约机时半小时以上仍未完成实验则须征得后一预约者的同意方可继续，否则应立即终止。 6. 实验开始前，用户应完整填写《仪器服务登记表》。实验进行期间，在实验现场的用户应遵守生化平台的管理规定，服从仪器管理员的工作安排。 7. 该服务项目产生的费用每年合并结算一次（分别在每年的11月进行），用户对管理员提供的测试时间、费用如果没有异议则需按照对账单要求进行付款，之后纳米生化平台按照中科院苏州纳米研究所统一规定提供增值税普通或者专用发票（用户须提供单位开票资料，签订相关合同）。如30个工作日未到账，平台将暂停用户使用该项服务的权利。 8. 本收费标准自发布之日起开始执行。 (责任编辑：) |